NGS와 생거 시퀀싱의 차이점 | NGS 대 Sanger 시퀀싱
주요 차이점 - NGS 대 생거 (Sanger) 시퀀싱
차세대 시퀀싱 (NGS)과 생거 시퀀싱은 그 동안 개발 된 두 가지 유형의 뉴클레오타이드 시퀀싱 기술입니다. Sanger Sequencing 방법은 수년 동안 널리 사용되어 왔으며 NGS는 최근의 장점으로 인해이를 대체했습니다. NGS와 Sanger Sequencing 사이의 주요 차이점은 NGS가 서열 분석 시스템을 통해 빠른 속도로 수백만 개의 서열을 동시에 시퀀싱한다는 원리에 기반하고 있으며, Sanger Sequencing은 dideoxynucleotides를 모세관 전기 영동에 의한 DNA 복제 및 파편 분리가 일어나는 동안 DNA 중합 효소.
목차
1. 개요 및 주요 차이점
2. Nucleotide Sequencing은 무엇입니까?
3. NGS 란 무엇입니까?
4. Sanger Sequencing이란 무엇입니까?
5. Side-Side 비교 - NGS 대 생거 시퀀싱
6. 요약
염기 서열 분석이란 무엇입니까? 유전 정보는 유기체의 DNA 또는 RNA의 뉴클레오타이드 서열에 저장된다. 주어진 단편 (유전자, 염색체 및 완전한 게놈의 집합체)에서 뉴클레오타이드의 올바른 순서 (4 개 염기를 사용)를 결정하는 과정을 뉴클레오타이드 시퀀싱
이라고합니다. 그것은 게놈 연구, 법의학 연구, 바이러스학, 생물학적 체계, 의학 진단, 생명 공학 및 기타 많은 분야에서 유전자의 구조와 기능을 분석하는 데 매우 중요합니다. 과학자들이 개발 한 여러 가지 유형의 시퀀싱 방법이 있습니다. 그 중에서도 Frederick Sanger가 1977 년에 개발 한 Sanger sequencing 는 Next Generation Sequencing 가 그것을 대체 할 때까지 널리 사용되어 대중화되었습니다.
NGS는 기존의 시퀀싱 생거 (Sanger) 방법에 비해 많은 장점이 있습니다. 작은 샘플 크기로 수행 할 수있는 빠르고 정확하며 비용 효율적인 프로세스입니다. NGS는 메타 게 노믹 연구, 삽입 및 삭제 등으로 인한 개별 게놈 내의 변이 검출 및 유전자 발현 분석에 사용될 수 있습니다.
Figure_1: NGS 시퀀싱의 발전Sanger Sequencing이란 무엇인가? Sanger Sequencing은 주어진 DNA 단편의 정확한 뉴클레오타이드 순서를 결정하기 위해 Frederick Sanger와 그의 동료들이 1977 년에 개발 한 서열 분석 방법이다. 이것은
chain termination sequencing
또는
Dideoxy sequencing 로도 알려져있다. 이 방법의 작동 원리는 DNA 복제 동안 ddGTP, ddCTP, ddATP 및 ddTTP와 같은 체인을 종결시키는 디데 옥시 뉴클레오타이드 (ddNTP)를 DNA 중합 효소로 선택적으로 도입하여 가닥 합성을 종결시키는 것이다. 정상 뉴클레오타이드는 가닥 형성을 계속하기 위해 인접한 뉴클레오타이드 사이에 포스 포디 에스테르 결합을 형성하기 위해 3'OH 그룹을 갖는다. 그러나, ddNTP는이 3'OH기를 갖지 않으며 뉴클레오티드 사이에 포스 포디 에스테르 결합을 형성 할 수 없다. 따라서, 사슬 신장은 중지된다. 이 방법에서, 서열화 될 단일 가닥 DNA는 in vitro DNA 합성을위한 주형 가닥으로 작용한다. 기타 요구 사항은 올리고 뉴클레오티드 프라이머, 데 옥시 뉴클레오티드 전구체 및 DNA 폴리머 라제 효소이다. 표적 단편의 인접한 말단이 알려질 때, 프라이머는 DNA 복제를 위해 쉽게 설계 될 수있다. 4 개의 분리 된 DNA 합성 반응이 4 개의 개별 튜브에서 수행됩니다. 각 튜브에는 다른 요구 사항과 함께 별도의 ddNTP가 있습니다. 특정 뉴클레오타이드로부터, dNTP 및 ddNTP의 혼합물이 첨가된다. 마찬가지로, 4 개의 분리 된 반응이 4 개의 혼합물로 이루어진 4 개의 튜브에서 수행된다. 반응 후, DNA 단편의 검출 및 단편 패턴의 서열 정보로의 전환이 수행된다. 생성 된 DNA 단편은 열 변성되고 겔 전기 영동에 의해 분리된다. 방사성 뉴클레오타이드가 사용되는 경우, 폴리 아크릴 아미드 겔의 밴딩 패턴을 오토 라디오 그래피 (autoradiography)로 시각화 할 수있다. 이 방법은 형광 태그가 달린 디데 옥시 뉴클레오타이드를 사용하면 판독 된 겔을 완화시켜 형광 검출기로 검출 할 수있는 레이저 빔을 통과시킬 수 있습니다. 눈으로 시퀀스를 읽고 컴퓨터에 수동으로 입력 할 때 발생할 수있는 오류를 방지하기 위해이 방법은 컴퓨터와 결합 된 자동화 된 시퀀서를 사용하도록 개발되었습니다. 이것은 인간 게놈 프로젝트로부터 DNA를 시퀀싱하는 데 사용되는 방법입니다. 이 방법은 비용이 많이 들고 느린 프로세스 임에도 불구하고 정확한 서열 정보를 제공하기 때문에 고급 수정과 함께 사용됩니다. 그림 2: 생거 시퀀싱
NGS와 생거 시퀀싱의 차이점은 무엇입니까? NGS와 Sanger Sequencing NGS (Next Generation Sequencing)는 현대적인 높은 처리량 시퀀싱 프로세스를 의미합니다.다양한 현대의 시퀀싱 기술을 설명합니다.
Sanger Sequencing은 주어진 DNA 단편의 정확한 뉴클레오타이드 순서를 결정하기 위해 Frederick Sanger가 개발 한 시퀀싱 방법입니다.
비용 효율성
